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Nanophotometer®是利用样品压缩法进行浓度测量的多功能仪器,广泛应用于生命科学和生物医药领域。由于压缩法具有良好的样品兼容性,特别适合于各类蛋白质样品的定量,无论是纯化蛋白、总蛋白、肽段样品或混合样品,均有对应的方法学支持。您可根据应用要求,选择合适的机型进行蛋白质的定量分析,获得可靠的结果。
UV280法 – 纯化蛋白定量金标准
对于具有确定消光系数的纯化蛋白,基于芳香族典型氨基酸的紫外吸收,UV280法可以非常准确的进行浓度测量,也是Nanophotometer®最常用的应用之一。使用UV280法时,应避免较强吸收物种的干扰,如裂解液RIPA成分。而对于消光系数未知的样品,也可使用OD1法进行相对浓度测量或估算。设备内置了常用蛋白质的消光系数,可以直接调用,也可以自定义消光系数,您可访问Implen官网:
https://www.implen.de/protein-uv-spectrophotometer/
输入蛋白质的氨基酸序列,进行消光系数的计算。
四种标准曲线方法
Nanophotometer®可进行四种蛋白质标准曲线法的分析(各型号有差异),分别为BCA、Bradford、Lowry和Biuret (仅支持比色皿测量),可通过对应的试剂盒与蛋白样品进行反应,通过标准曲线计算蛋白浓度,适用于总蛋白及纯化蛋白的定量。Nanophotometer®不同机型的扫描波长在200-650nm或200-900nm,涵盖了可见光区吸收的应用。标准曲线支持存储及直接调用,即使是单通道的机型也能便捷的进行标曲法蛋白定量。而N120高通量机型则支持标准曲线的多通道测量,可大幅提升测量效率。
A205肽键吸收法 – 寡肽定量
对于缺少芳香族典型氨基酸的寡肽和肽段样品,由于无吸收峰,UV280法可能不适用。此时可使用UV205法测量肽键的半峰吸收,获得样品的吸光值和浓度。近紫外区的测量对于超微量分光光度计而言具有挑战性,容易受到检测器和光学系统噪声及漂移的影响。Nanophotometer®具有出色的光学系统和4096CMOS阵列检测器配置,可确保在全波长范围内的测量准确性。
公式法 – 混合物中蛋白定量
一些样本中除蛋白质外还包含其他在280nm处有吸收的组分,可通过校正系数及公式进行其中蛋白浓度的测量,如含有核酸的样本,可使用经验公式:蛋白质浓度=1.45×A280-0.74×A260。也可通过纯品的测量,确认A280的校正系数,进行干扰组分吸光值的扣除。Nanophotometer®可进行公式创建,满足混合物中蛋白定量的应用需求。
独特的样品压缩技术使Nanophotometer®区别于同类产品,蛋白质样品由于溶质和溶剂成分、粘度等因素的影响,往往会降低表面张力而不易被测量,而这恰恰令样品压缩法能够大显身手。设备具备丰富的蛋白质测量应用程序及方法学设定,还具备背景校正和样品质量控制功能。仅需微升级样品,即可获得紫外-可见全光谱吸收数据,包括蛋白及偶联物的同时分析。从生物医学到药物研发,从结构生物学到交叉学科,Nanophotometer®是蛋白质定量的理想工具。