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    Implen小课堂:样品吸光值和OD值有什么区别?

    在使用超微量分光光度计测量样品时,结果通常以吸光值显示,并转换为浓度结果。而在一些使用场景下,客户习惯或需要用OD值表述结果,这两个物理量看似是一样的,都是对

    物质吸光能力和吸光度的表征,但严格来讲却有一定的区别。


    先说核心关系:

    吸光值 (Absorbance, A) ⊇ OD值 (Optical Density, OD)

    您可以简单的理解为:所有的OD值都是吸光值,但并非所有的吸光值都叫OD值。


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    吸光值的定义


    定义: 根据朗伯-比尔定律,吸光值是一个无量纲的物理量,表示溶液对特定波长光的吸收程度。

    计算公式: A = -log₁₀(I / I₀)

    吸光值与特定波长相关联。例如,在260nm处的吸光值表述为A₂₆₀。吸光值的应用非常广泛: 用于测量清澈、均匀的溶液中某种特定溶质的浓度。例如:测量DNA/RNA浓度(A₂₆₀);测量蛋白质浓度A₂₈₀或各种标准曲线比色法;测量化学反应的进程,其理论基础是溶质分子对光子的吸收,以及由于非吸收导致的光衰减,其中就包括颗粒物的散射,以及气泡的折射等。所以吸光值包括两部分:真实的“”光值和其他因素导致的光衰减,由于检测器本身无法进行区分,都会显示为吸光值结果。但仪器通常具备背景校正功能,可以对结果中的非吸收因素进行一定程度的校正(可参考 320?340?核酸蛋白定量中背景校正的作用和选择)。



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    OD值的定义



    定义: OD值是吸光值的一种,通常用来衡量浑浊样品(如细菌细胞悬浮液、酵母培养液、颗粒物)对光的衰减程度。

    计算公式: 公式与吸光值完全相同:OD = -log₁₀(I / I₀)


    光的衰减机制: 在浑浊液中,光的减弱主要不是由分子吸收引起的,而是由散射引起的。细胞或颗粒将入射光向各个方向散射,导致探测器接收到的非散射光(透射光)强度减弱。OD值表述在微生物学中是常用的,OD600几乎成为一个标准。选择600nm是因为这个波长的光不会被培养基中的常见组分(如LB培养基)显著吸收,且对微生物的伤害较小。一些特殊的培养物也可用OD550、OD650等测量。而其他一些应用,如对颗粒物的散射表征也使用OD450等,具体方法学的建立可参考文献会进行方法学开发。


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    为什么在表述中经常混用?


    1. 测量仪器相同: 两者都是用分光光度计等仪器来测量的。

    2. 计算公式相同: 仪器内部都是使用-log(I/I₀) 这个公式来计算并显示读数。

    3.历史习惯: 例如在微生物学领域,人们已经习惯了使用“OD”这个词,即使仪器屏幕上显示的是“Abs”,大家也心照不宣地称之为“OD值”。



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        当您测量的是澄清的溶液,并想知道其中某种溶质的浓度时,您测得的是吸光值。当您测量的是浑浊的细菌或细胞培养液、颗粒物悬浊液,并想估算细胞或颗粒物密度时,您测得的是OD值。虽然在日常对话中混用可能不会引起误解,但在严谨的科学写作、报告或实验记录中,使用准确的术语是非常重要的。

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