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核酸和蛋白样品除了浓度测量之外,纯度比值也是客户经常需要的数据,以评估样品的纯度以及潜在的污染,纯度合格的样本可用于下游PCR和测序等实验。在实践中,不同品牌型号的仪器可能测得的样品浓度是相同的,但纯度比值往往会有差异,虽然样本的纯度比值允许范围较宽泛,但造成这种差异的原因往往困扰着实验者,摸不准哪台仪器更准确,而一些边界测值更使用户不敢轻易相信自己的样本提取流程,可谓提心吊胆。
纯度比值:被放大的误差 针对同一台仪器而言,比值的测量误差会相对较大,准确的讲,是测量的不确定度相对较大。这显然是由于分子和分母各自都带有测量误差,因此计算值的误差会放大。如果是不同仪器,则相对的不确定度更大,这是一个简单的数学理解。具体则取决于设备本身的测量准确性,特别是在不同波长下的测量准确性,这对于一些高浓度样本而言,更具挑战。 半峰测量:更具挑战 A260/A230比值是在吸收峰和吸收谷(通常)处测得,由于曲线相对平缓,数据较稳定。而核酸样本的A260/A280比值,其中A280(蛋白质样本则是A260)是在非吸收峰处测量的,曲线非常陡峭,除了吸光值检测的准确性之外,还需要考虑测量波长的准确性,微小的波长偏移可能导致A280较大的上下浮动,从而影响A260/A280比值。而由于不同仪器的光学配置和性能可能存在差异,因此由波长偏移导致的比值测量误差就会表现出来。 波长准确性:关键参数 用户在采购设备时,往往更关注浓度范围、波长范围,而经常忽略波长准确性这一重要参数。而实际上,对于二维光谱图而言,纵坐标Y和横坐标X同样重要,在任何分光光度计设备的检查和计量过程中,波长准确性相关参数的确认都是很重要的。这不仅体现在光谱扫描、光谱表征的一些应用上,也体现在诸如核酸纯度比值测量这类基础应用上。 Nanophotometer®的比值测量 无数的实验印证过Nanophotometer®对波长准确性的把控,和比值测量的准确性。NP80和N60等机型具备出色的优于±0.75nm的波长准确性,优于市面其他绝大多数机型的±1nm精度,即使是基础型的N50机型,也保障优于±1.5nm的波长准确性。而设备的实际测试值,波长的把控通常落在0.01nm-0.3nm之间,并且长期使用过程中保持稳定。Implen从不虚标参数,反而是给出很保守的性能数据,保障结果的可靠性。各型号机型采用的4096像素CMOS阵列检测器,更是充分保障了吸光值测量的准确性。使用Implen产品作为放行标准的用户,在保障效率的同时,更可以对自己的样本满怀信心并经得起考验。 在科研服务领域,Implen拥有广泛的用户群,每天有海量的样本通过Nanophotometer®进行浓度定量和纯度比值测量,以确认放行与否。这不仅关乎企业产品的质量,更关乎广大科研人员的实验流程及数据可靠性。当您理解了不同仪器比值测量差异的影响因子,相信您能够进行更科学的结果评估。充分的了解,更好的使用,Nanophotometer®是样本比值测量的可靠工具。




