在超微量分光光度计的日常使用中，经常使用背景校正功能，对样品的浓度结果进行校正。通常用于背景校正的波长选择默认为320nm，但也有的设备默认为340nm。虽然320nm和340nm背景校正的本质原理相同，都是用于修正光散射导致的吸光度误差，但它们在适用场景、灵敏度和对校正模型的依赖性上有重要区别。320nm背景校是更通用、更常规的选择，而340nm背景校正更适用于一些高度浑浊、高散射或特殊类型的样品。
基本原理：背景校正的核心是假设光散射强度与波长的 n 次方成反比（I ∝ λ^-n）。最常用的是瑞利散射模型（n≈4），即波长越短，散射越强。
320nm校正：由于320nm离核酸/蛋白的主要分析波长（260nm, 280nm）较近，在校正计算时，从320nm外推至260nm，对所选用的散射模型（n值）不那么敏感。这意味着即使实际散射不完全符合瑞利模型，校正结果也相对可靠。但更短的波长，如310nm，虽然更接近检测波长，但样品的吸收并未截止，因此并不适用。
340nm校正：由于340nm离分析波长更远，在校正计算时，需要从更远的波长外推。这使得校正结果对散射模型（n值）非常敏感。如果实际样品的散射特性与预设模型不符，使用340nm校正可能引入更大的误差。
320nm校正：对于轻度及中度颗粒散射的样品非常有效。它距离分析峰较近，能更灵敏地检测到由微小颗粒引起的散射信号，并用于校正。
340nm校正：通常用于高度浑浊、有可见悬浮物或高浓度大分子聚集体的样品。当样品非常浑浊时，在320nm处的吸光度本身可能已经很高（甚至超出检测线性范围），无法准确反映散射水平。此时，使用更长的340nm可以避开过强的吸收，获得散射本底读数。 对于绝大多数常规的核酸或蛋白质样品，320nm背景校正是更通用的、推荐的首选设置，也是大多数仪器的默认设置。这是因为经过大量测试，对于生物实验室常见的、纯度尚可的核酸蛋白样品，320nm校正能在模型可靠性和散射检测灵敏度之间取得很好的平衡。320nm背景校正足以有效校正由少量细胞碎片、颗粒物、气泡或溶液不均一引起的散射，从而改善测量结果更接近真值。320nm背景校正对数学模型的依赖性较低，结果更可靠。1. 样品非常浑浊：例如从土壤、植物组织或某些细菌中提取的未精制核酸，含有大量不溶性杂质。
2. 测量高浓度样品时：高浓度的核酸或蛋白溶液本身可能因分子聚集而产生一定浊度。
3. 当320nm校正效果不佳或怀疑时：如果你发现开启320nm校正后，260/280比值仍然异常低（如DNA低于1.6），或者光谱基线在长波长区仍然明显上翘，可尝试切换到340nm校正，观察结果是否变得更合理。
4. 历史方法一致性：如果你的实验室或所遵循的特定实验方案历史上一直使用340nm，为了保持数据可比性，可以继续使用，但这并不代表结果是更准确的。
Implen Nanophotometer®遵循更科学的通用的设置，默认使用320nm进行背景校正，同时也可设置340nm，或使用350nm之内的其他波长进行背景校正，或关闭背景校正。这即满足了绝大多数用户的使用需求，获得更可靠的结果，同时也具备自定义的灵活性。但值得一提的是，单波长背景校正只是一种补救措施。最佳的实践是优化样品制备流程，获得尽可能澄清、无颗粒的样品，或使用多元散射校正等校正模型。专注科学，分享知识，德国Implen。
