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利用紫外-可见吸收的原理，可通过多种方法进行蛋白质浓度测量，除了BCA、Bradford、Lowry、Buiret等标准曲线法之外，UV280法蛋白质测量，对于吸光系数已知的纯化蛋白定量，是结果非常准确的金标准方法。由于不需要使用外标标准物质，UV280法操作直接、简单且不确定因素较少，因此对于纯蛋白的定量或混合蛋白的相对定量来说，是非常方便和快速的。然而，在实际实验中，用户可能由于对检测原理的不了解，得到误差很大的错误结果，从而对整个研究项目造成严重的后果。
浓度是计算出来的
在使用超微量分光光度计时，UV280法并不是直接测量浓度，而是测量吸光值，通过朗伯-比尔定律计算浓度。因此，各种样品的吸光系数作为重要的因子，是决定计算结果的变量。而另外一个变量为光程（光穿过液层的距离），在设备正常的情况下，可视为固定的已知量。吸光系数对于核酸样品来说，由于DNA/RNA链的相对均一性和减色效应，一般取固定值。而蛋白质样本由于氨基酸组成的差异性较大，吸光系数也会有很大的差异。
吸光系数会差多少
由于蛋白质的紫外吸收主要是由含有共轭结构的典型氨基酸产生的，包括酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸的二硫键，因此不同氨基酸组成的蛋白质的吸光系数有可能相差很大，特别是分子量大的蛋白和分子量小的蛋白之间。通常分子量较小的蛋白质，吸光系数会小于1，而分子量大的蛋白质，吸光系数会大于1，这就意味着，如果选择了错误的蛋白质种类或吸光系数，测得的浓度结果可能相差1-2倍以上甚至更多。
与预期结果相差很远？
对于成熟品牌和技术来说，仪器本身出现巨大的误差的几率还是比较低的，由计算公式错误导致的偏差是最常见的原因，因此首先需要确认的就是样本种类和吸光系数是否选择或输入正确。我们通常所说的吸光系数是指千分之一质量浓度的消光系数，即1000g/L的溶液对应的系数，而在一些场合下，这个系数可能是百分之一质量浓度的消光系数，即100g/L溶液对应的消光系数，又称作蛋白质系数，这两个值相差10倍，如某抗体千分之一浓度消光系数为1.45，则百分之一消光系数为14.5，需要特别注意不要输入错误，否则将引入10倍的计算错误。
在超微量分光光度计的实际使用过程中，误差的来源是多种的，较小的误差可能由于清洁问题或光程漂移，仪器需要清洁或进行校准维护，而较大的误差则需考虑计算原因或外部原因，包括样本的均质性或具有浊度。因此，了解仪器可能得误差来源，特别是由于吸光系数计算导致的蛋白定量错误，是很有必要的。Nanophotometer®已内置多种常用蛋白质的吸光系数，并可以自定义质量或摩尔吸光系数，在参数设置正确的情况下，可获得非常可靠的的纯化蛋白定量结果，直接给出浓度值，已成为科学家信赖的蛋白定量工具。
